Pour commencer, dans la hotte stérile, vissez les pots de l’autoclave à 24 puits dans le module de cellule stérilisé à l’éthanol. Ajoutez 900 microlitres de média de base dans chaque pot. Connectez maintenant les électrodes de trempage de l’autoclave magnétiquement au couvercle du module de cellule.
Fermez ensuite le couvercle sur les puits afin que les électrodes de trempage s’insèrent dans les pots d’électrodes inférieurs. Ensuite, fixez le module de cellule à l’adaptateur dans un incubateur. Lancez ensuite le logiciel, et cliquez sur l’onglet layout pour charger et annoter la carte de plaque expérimentale.
Utilisez une plaque de culture stérile à 24 puits pour maintenir les inserts membranaires. Lorsqu’un enrobage est nécessaire, ajoutez une solution de matrice extracellulaire à l’intersection du puits À l’aide d’une pipette à canal unique, ensemencez soigneusement les cellules endothéliales du cerveau dans la chambre apicale de chaque insert de puits. Pour créer un puits sans cellule, pipetez uniquement le support complet dans l’un des inserts.
Transférez ensuite le module cellulaire de l’incubateur dans une hotte stérile. À l’aide d’une pince à épiler, transférez soigneusement les inserts préparés dans les pots d’électrodes. Replacez le module de cellule dans l’incubateur au-dessus de l’adaptateur.
Localisez ensuite la section du spectre dans l’onglet de contrôle de l’expérience, puis sélectionnez Démarrer à un hertz et S’arrêter à 100 kilohertz pour acquérir des données sur toute la gamme de fréquences. Ensuite, sous le temps d’attente, sélectionnez 15 minutes pour permettre des mesures continues à la vitesse la plus rapide. Appuyez sur Démarrer pour lancer la collecte de données.
Après environ 48 heures, une fois qu’un plateau de résistance endothéliale est atteint, placez les traitements préparés dans un incubateur pour maintenir une température optimale. Retirez le module de cellule à un moment de traitement sélectionné qui commence immédiatement après une mesure de 15 minutes. Dans une hotte stérile, ouvrez le module de cellule.
Ensuite, pipetez soigneusement 70 microlitres du traitement dans la chambre apicale de l’insert respectif. Remettez immédiatement le module de cellule dans l’adaptateur avant le début de la mesure suivante. Pour terminer l’expérience, appuyez sur le bouton d’arrêt, puis cliquez sur fichier, puis sur exporter pour exporter les données directement dans un fichier XLS, et nommez-le de manière appropriée.
Bien qu’une certaine variation ait été observée entre les puits répliqués, la normalisation des données a réduit cette variation et a permis une meilleure comparaison du traitement avec le témoin. Une diminution transitoire de la résistance électrique transendothéliale a été observée lorsque des cytokines ont été ajoutées. Les lignées cellulaires de mélanome ont provoqué une diminution substantielle de la résistance en cinq heures.
