Pour commencer, préparez les souris anesthésiées à l’intervention chirurgicale. À l’aide de ciseaux chirurgicaux, incisez la peau le long du centre de la zone rasée de la tête pour exposer le crâne. Ensuite, nettoyez le crâne avec un coton-tige stérile utilisant du peroxyde d’hydrogène dilué pendant une à trois secondes et séchez le crâne avec un nouveau coton-tige stérile.
Pour aligner le crâne en avant et en arrière, mesurez la profondeur ventrale dorsale au niveau du bregma et du lambda. En utilisant bgma comme point de départ, localisez et marquez la zone souhaitée sur le cortex. Ensuite, utilisez un foret à trépan et une fraise dentaire pour exposer le cortex.
Assurez-vous que l’angle du foret est perpendiculaire à la courbure du crâne pour obtenir une craniotomie uniforme et éviter les dommages. Percez jusqu’à ce qu’une réduction de la résistance se fasse sentir, puis arrêtez le processus de perçage. À l’aide d’une pointe d’aiguille de calibre 23, retirez soigneusement le fragment d’os détaché.
Maintenant, nettoyez le cortex exposé avec de la mousse chirurgicale imbibée d’ACSF froid pour éliminer tous les débris et arrêter tout saignement. Faites une incision pour faciliter l’insertion du microprisme et soulager la pression dans le cortex. Fixez le couteau chirurgical au support sur le bras stéréotaxique et orientez la lame ou le bras stéréotaxique pour couper le long de l’axe latéral médial.
Maintenant, déplacez le couteau à la coordonnée antérieure postérieure souhaitée. Ensuite, déplacez le couteau vers le bord médial de la craniotomie et abaissez-le lentement jusqu’à ce qu’il touche l’os. Utilisez l’équation donnée pour déterminer la profondeur de l’incision prédécoupée à partir de la surface du crâne.
Assurez-vous que la longueur de l’incision est supérieure à un millimètre. Idéalement, il devrait être d’environ 1,2 millimètre. Déplacez le couteau du bord médial de la craniotomie à la coordonnée médiale de départ de l’incision et abaissez lentement le couteau dans le cortex.
Après avoir percé la dure-mère et pénétré dans le cortex, appliquez une goutte d’ACSF froid pour garder le tissu lubrifié et hydraté. Une fois la profondeur finale atteinte, déplacez le couteau le long de l’axe latéral médial. Si le tissu traîne avec le couteau, déplacez le couteau de haut en bas plusieurs fois pour vous assurer que le tissu est coupé.
Ensuite, continuez à vous déplacer latéralement tout en ramenant le couteau à sa profondeur finale. Une fois terminé, soulevez lentement le couteau. Si du sang apparaît, nettoyez le site d’incision avec de la mousse chirurgicale imbibée d’ACSF pour diluer et éliminer le sang.
Placez une mousse saturée sur le cortex exposé jusqu’au moment d’insérer le microprisme. Fixez le microprisme au kit d’implant. Assurez-vous que le côté imagerie du prisme est opposé à la vis de la plaque de base.
Fixez le microprisme au cadre stéréotaxique et orientez-le pour l’aligner avec l’incision. Abaissez lentement le microprisme dans le site d’incision. Retirez l’ACSF au départ, mais une fois que le prisme est dans le cortex, rincez-le avec de l’ACSF froid.
Si nécessaire, ajoutez de l’ACSF supplémentaire et agitez le cortex en déplaçant le prisme de haut en bas. Couvrez la zone corticale exposée et la lentille avec une couche protectrice d’adhésif en silicone minimisant l’excès d’adhésif sur le crâne environnant et la lunette factice. Maintenant, positionnez la plaque de tête vers l’arrière pour un placement correct de l’implant dans l’application de ciment.
Alignez la ligne médiane de la plaque de tête légèrement à droite de la craniotomie proposée pour vous assurer que les deux côtés peuvent être fixés pendant les expériences de fixation de la tête. Ensuite, mélangez une cuillère de poudre de ciment opaque avec quatre gouttes de milieu de mélange et une goutte de catalyseur pour préparer du ciment dentaire adhésif. Appliquez du ciment sur la plaque de tête et le crâne et maintenez la plaque de tête en place jusqu’à ce que le ciment durcisse.
Appliquez du ciment adhésif pour couvrir le crâne et les tissus exposés, en incorporant le microprisme et la plaque de tête jusqu’à ce qu’ils soient stables. Déplacez le bras stéréotaxique vers le haut tout en stabilisant le microprisme avec une pince pour détacher le microscope factice. Placez le couvercle de protection sur l’objectif et fixez-le en serrant la vis.
Les neurones d’animaux explorant une arène ouverte dans l’obscurité ont montré des niveaux comparables de fluorescence et de taux de tir lors de sessions espacées de trois semaines.
