Arabidopsis thaliana Stérilisation et culture de la surface des semences en chambre de croissance

Pour commencer, ajoutez les quantités requises de graines d’arabidopsis thaliana Columbia zero dans un microtube à centrifuger de deux millilitres. Pour la stérilisation de surface des graines, ajoutez 70 % d’éthanol dans le tube pendant deux minutes et secouez doucement le tube. Après avoir retiré l’éthanol, lavez les graines à l’eau stérile pendant cinq minutes.

Retirez l’eau du tube et laissez les graines sédimenter au fond du tube par gravité avant d’éliminer l’eau restante. Pour créer une suspension d’eau de graines, ajoutez un volume égal d’eau stérile dans le tube contenant les graines. À l’aide d’une large pointe de pipette, répartissez uniformément environ 30 à 40 graines d’affilée dans chaque zone de la plaque moyenne en suivant une grille de semis.

Laissez l’eau sécher dans les graines pendant 30 minutes. Scellez la plaque avec du ruban adhésif microporeux et enveloppez-la dans du papier d’aluminium. Stratification des graines pendant trois jours à quatre degrés Celsius dans l’obscurité pour surmonter la dormance des graines et favoriser une germination uniforme.

Ensuite, déballez le papier d’aluminium de la plaque et transférez la plaque avec les graines stratifiées à la lumière blanche pendant une heure pour induire la germination. Enveloppez la plaque de papier d’aluminium après le traitement à la lumière pour protéger les graines de la lumière. Placez la plaque en position verticale dans une chambre de culture et cultivez-la pendant quatre jours dans l’obscurité à 21 degrés Celsius.