Dans des conditions stériles, à l’aide d’une pince à épiler, transférer cinq à 10 lignes racinaires poilues de Brassica napus sur un plat contenant un milieu de régénération. Scellez le plat avec du ruban adhésif perméable au gaz et cultivez à 21 degrés Celsius lors d’une photopériode de longue durée. Toutes les trois à quatre semaines, transférez les racines poilues dans une boîte de Pétri avec un milieu de régénération frais.
Observez la formation calleuse après environ deux semaines et tirez à partir de la callosité après deux semaines supplémentaires de formation calleuse. Individualisez les pousses et transférez-les dans la boîte de culture contenant le milieu d’élongation des pousses. Après deux à trois semaines, coupez les restes de callosité de la pousse et transférez les pousses allongées dans la boîte de culture contenant le milieu d’induction des racines.
Maintenant, transférez la plante enracinée dans le sol et acclimatez-la d’abord dans les phytotrons Ensuite, transférez la plante dans une serre pour la floraison. Pour accélérer la production de plantes T1, prélevez des siliques contenant des graines vertes matures des régénérants T0. Tout en travaillant dans une boîte à flux stérile, stérilisez les siliques en surface avec de l’éthanol à 70 %.
Placez les siliques sur un couvercle d’assiette ou une glissière. À l’aide d’une aiguille de calibre 24 montée sur une seringue d’un millilitre, fendez les siliques le long des bords de la valve. Ouvrez les carpes et mettez-les de côté.
Récupérez les graines immatures et transférez-les dans une assiette contenant un milieu de germination des graines. Scellez la plaque et placez-la dans une salle de culture jusqu’à la germination. Par rapport au type sauvage, la régénération des racines poilues de B.napus présentait un phénotype nain avec des systèmes racinaires denses, des feuilles ridées et une période de floraison altérée.
