Analyse d’images en fond clair et en fluorescence de coupes de cerveau de souris pour la microscopie corrélative à la lumière et à la microscopie électronique post-intégration d’Epon

Pour commencer, capturez les images en fond clair et fluorescentes du tissu cérébral de souris exprimant mScarlet. Localisez les données brutes pour créer une carte de navigation de plusieurs images Brightfield de différents champs de vision dans ImageJ. Ouvrez ensuite ImageJ, naviguez dans les plugins, cliquez sur l’assemblage et sélectionnez l’assemblage de la grille ou de la collection.

Cliquez sur le type de serpent de grille par colonne, sélectionnez Ordre vers le haut et vers la gauche, puis cliquez sur Définir la taille de la tranche. Naviguez jusqu’à sélectionner le chemin d’accès aux données et cliquez sur définir le nom du fichier, puis cochez la fusion de l’affichage. Pour importer des images Fond clair séquentielles d’une cellule spécifique, cliquez sur fichier et sélectionnez importer, puis séquence d’images.

Pour la projection de l’intensité de la somme de ces images, accédez à image, sélectionnez piles, cliquez sur Projection Z, puis cliquez sur Somme des tranches. Sélectionnez ensuite modifier et cliquez sur inverser pour inverser l’image de projection de l’intensité totale et améliorer la visibilité des nanoparticules d’or. Ensuite, importez des images de fluorescence séquentielles.

Pour créer une image de projection d’intensité totale, cliquez sur image et sélectionnez piles. Allez ensuite dans la projection Z, cliquez sur Somme des tranches et enregistrez les images au format TIF. Ouvrez les images de projection d’intensité totale des images en fond clair et en fluorescence.

Accédez à l’image, sélectionnez la couleur, puis cliquez sur Fusionner les canaux pour fusionner la projection de l’intensité totale de l’image Fond clair avec l’image de fluorescence. Ensuite, sélectionnez l’image et cliquez sur type, suivi de Couleur RVB pour convertir le format de l’image composite en RVB. Les nanoparticules d’or apparaîtront vertes et la protéine fluorescente apparaîtra rouge.

Enregistrez ensuite l’image en tant que fichier TIF.