Enregistrement de l’image de microscopie à fluorescence avec l’image de microscopie électronique pour la microscopie corrélative à la lumière et la microscopie électronique

Pour commencer, ouvrez le logiciel d’enregistrement et recherchez EasyCLIMv0. Une fois trouvé, cliquez sur EasyCLIMv0, cliquez sur Image ou Séquence, puis sélectionnez Ouvrir pour importer l’image de microscopie électronique et les images composites d’images en fond clair et fluorescentes. Dans l’interface EasyCLIMv0, cliquez sur 2D XYT pour sélectionner le mode d’alignement 2D ou 3D non rigide.

Dans la fenêtre EasyCLIMv0, cliquez sur la liste déroulante à droite de l’image sélectionnée qui sera transformée et redimensionnée, probablement FM, pour choisir une image composite RVB, puis cliquez sur la liste déroulante à droite de l’image sélectionnée qui ne sera pas modifiée, probablement EM, pour choisir six images tiff. Cliquez sur Démarrer pour lancer le processus d’inscription. Dans la fenêtre d’image de microscopie électronique à six images, cliquez sur une nanoparticule d’or pour placer 0,1 dessus.

Dans la fenêtre d’image de microscopie à fluorescence, la couleur RVB composite tiff. Cliquez sur la nanoparticule d’or correspondante pour y mettre 0,1. Cliquez ensuite sur Mettre à jour la transformation pour confirmer l’alignement des signaux de fluorescence et de microscopie électronique des nanoparticules d’or et terminez l’enregistrement en cliquant sur Arrêter.

Pour exporter la pile d’images alignées contenant quatre images de couche, cliquez sur l’image superposée, sélectionnez Image ou Séquence, puis cliquez sur Enregistrer sous.Ouvrez maintenant ImageJ, cliquez sur Fichier et sélectionnez Ouvrir pour importer l’image de superposition. Accédez à Image, cliquez sur Piles, puis empilez deux images pour les séparer en quatre images de canal. Ensuite, sélectionnez Image et cliquez sur Couleur, puis sur Fusionner les couches pour fusionner les trois couches en une image composite.

Pour convertir l’image composite en une image corrélative de microscopie optique et électronique, sélectionnez Image, puis Type, puis cliquez sur Couleur RVB.