Pour commencer, placez les larves de drosophile dans une boîte de Pétri vide de 35 millimètres et utilisez une pince pour les laver deux fois avec de l’eau du robinet pour éliminer toute nourriture restante. Placer 10 larves sur une boîte de dissection contenant du PBS glacé. Positionnez le côté dorsal de la larve vers le haut et épinglez chaque extrémité au plat.
Faites une petite incision sur la paroi corporelle de l’extrémité postérieure. À l’aide de ciseaux de microdissection, coupez la paroi du corps le long de la ligne médiane dorsale vers l’extrémité antérieure. Rincer l’intérieur de la larve trois fois avec du PBS à l’aide d’une pipette Pasteur pour exposer le cerveau.
Localisez et soulevez le cerveau à l’aide de pinces et isolez-le avec des ciseaux de microdissection. Transférez les cerveaux disséqués dans un micro-tube de centrifugation rempli de PBS glacé et collectez tous les cerveaux sur de la glace. Effectuez l’extraction de l’ARN à l’aide d’un kit de micropréparation d’ARN.
Pour l’isolement des cellules S2 Schneider, ajoutez cinq millilitres de PBS glacé à la culture cellulaire Schneider. Transférez les cellules dans un tube de 15 millilitres, puis centrifugez à 1000 G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius pour granuler les cellules. À l’aide d’une pipette, rincez les cellules deux fois avec du PBS glacé et centrifugez-les à nouveau.
Effectuez l’extraction de l’ARN à l’aide d’un kit de mini-préparation de l’ARN.
