Pour commencer, retirez le PBS des cerveaux de drosophiles disséqués par une brève centrifugation. Ajoutez ensuite 600 microlitres de tampon de lyse de l’ARN à l’échantillon et homogénéisez 10 fois avec un pilon en plastique. Inspectez le tube au stéréomicroscope pour une lyse complète.
Centrifuger à 1000 G pendant 5 minutes à 4 degrés Celsius pour éliminer les débris tissulaires. Transférez le surnageant éliminé dans un nouveau tube de microcentrifugation. Isolez l’ARN à l’aide d’une trousse de micro-préparation d’ARN en suivant les instructions du fabricant.
Pour les cellules S2, retirez le PBS et isolez l’ARN. Déterminez la pureté et la quantité d’ARN en mesurant le rapport de densité optique à 260 et 280 nanomètres. Pour préparer l’échantillon à l’électrophorèse, diluez l’échantillon d’ARN à 40 nanogrammes par microlitre et ajoutez le colorant de charge d’ARN.
Chauffer les échantillons à 70 degrés Celsius pendant 5 minutes. Dans un gel d’agarose, chargez l’échelle d’ARN et les échantillons. Effectuez une électrophorèse dans un tampon MOPS à 100 volts pendant 60 minutes et visualisez le gel sur un transilluminateur UV.
La visualisation d’ARN isolés à partir de cerveaux larvaires de drosophile par électrophorèse à agarose a montré une seule bande d’ARN à environ 600 nucléotides, indiquant une préparation d’ARN intacte.
