Pour commencer, mesurez et ajoutez les composants de média requis dans une bouteille de 1 litre. Ajustez le pH en fonction de la culture microbienne d’intérêt et mélangez les composants jusqu’à homogénéité en faisant tourner le flacon. Faites bouillir le liquide au micro-ondes pendant cinq à six minutes, en ouvrant souvent le micro-ondes et en faisant tourner doucement la bouteille à l’aide d’un gant résistant à la chaleur.
Ensuite, fixez une pipette en verre stérile de 10 millilitres à un collecteur d’azote gazeux. Ouvrez le collecteur pour évacuer l’oxygène et permettre à l’azote gazeux de s’écouler. Placez la pointe de la pipette dans le liquide et ajustez le débit de gaz pour que les bulles soient modérément vigoureuses.
Rincez le liquide avec de l’azote jusqu’à ce que la bouteille ne soit plus trop chaude au toucher. En attendant que la bouteille refroidisse, disposez 10 bouteilles de culture stériles de 100 millilitres. Une fois que le flacon de support atteint une chaleur supportable, tirez la pointe de la pipette vers le haut dans l’espace libre du flacon.
Ajoutez 0,125 gramme de bicarbonate de sodium et 0,3 gramme de sulfure de sodium non hydraté et attendez que la résazurine devienne incolore. En attendant que la resazurine change de couleur, fixez des canules métalliques à la configuration du collecteur de gaz. Ajustez le débit d’azote à un débit modéré et placez les pointes des canules dans des flacons de culture.
Une fois que la résazurine est incolore, aliquotez 50 millilitres de liquide dans chaque bouteille de culture. Boucher chaque bouteille avec un bouchon en caoutchouc de taille adaptée immédiatement après avoir retiré les canules. Fixez ensuite le bouchon avec un joint en aluminium.
Placez les bouteilles dans un bac autoclavable et remplissez le bac d’eau du robinet jusqu’à ce que les niveaux d’eau correspondent à ceux des bouteilles. Autoclavez les bouteilles à 121 degrés Celsius pendant 30 minutes.
