Coloration halo-ligand de cellules pour des études d’interaction de condensats de protéines à l’aide de l’imagerie à molécule unique

1 Après avoir créé les lignées cellulaires2 exprimant la protéine d’intérêt HaloTag et Halo-H2B, 3 préparez le réactif de coloration du ligand halo 4 séparément pour les deux. 5 Rincez les cellules avec deux millilitres de PBS. 6 Ajoutez un ligand halo contenant du milieu 7 et incuberez-les à 37 degrés Celsius 8 avec 5% de dioxyde de carbone pendant une heure.

9 Après avoir retiré le milieu de coloration, 10 rincez les cellules quatre fois avec du PBS 11 et incubez-les avec un milieu frais dépourvu de ligands de halo. 12 Après quatre cycles d’incubation par rinçage, 13 transférez la lamelle avec les cellules 14 dans une chambre compatible avec la platine de microscope 15 avec une pince stérile. 16 Ajoutez un milieu sans rouge de phénol dans la chambre avant l’imagerie.