Pour commencer, prenez des rétines isolées dans une boîte à 24 puits remplie d’eau distillée double. Ensuite, remplacez l’eau doublement distillée par 800 microlitres de solution de trypsine YL et incubez à 37 degrés Celsius avec une agitation douce ou nulle pendant 4 heures et 15 minutes. À l’aide de la pipette de transfert en verre trempée dans une solution de trypsine YL, transférez la rétine dans une boîte de Pétri de 35 millimètres contenant de l’eau doublement distillée non pelucheuse.
Pour enlever la couche nucléaire externe, retournez la demi-sphère de la rétine vers le bas et utilisez une brosse à poils simple droite pour la presser doucement au fond du plat. Utilisez une brosse à boucle pour brosser doucement les photorécepteurs de la rétine. Ensuite, pour retirer le vitré, retournez la demi-sphère de la rétine vers le haut.
Utilisez une pince incurvée pour saisir le vitré sous un microscope de dissection. À l’aide d’une autre pince incurvée, saisissez l’extrémité du vitré à l’endroit où il relie le nerf optique. Éloignez les deux pinces l’une de l’autre pour retirer et jeter le vitré.
Ensuite, retournez à nouveau la rétine vers le bas et utilisez la brosse droite pour la presser doucement au fond du plat. Ensuite, utilisez la brosse à boucle pour brosser le système vasculaire de la tête du nerf optique vers la périphérie afin d’éliminer le tissu neural restant. Faites tourner lentement la rétine avec la brosse droite et utilisez la brosse à boucle pour retirer tous les petits morceaux de tissu neural jusqu’à ce que le réseau vasculaire soit propre.
Pour monter le système vasculaire rétinien, utilisez la brosse à boucle pour retourner la demi-sphère rétinienne vers le haut et poussez doucement le système vasculaire vers le bas sur la lame de verre. Ensuite, utilisez les cheveux pour fixer le système vasculaire ouvert au centre de la lame. Brossez le vaisseau rétinien en forme de bol du nerf optique à la périphérie pour monter à plat le système vasculaire.
Répétez le brossage dans toutes les directions jusqu’à ce que le système vasculaire adhère complètement à la lame.
