Coloration immunohistochimique fluorescente cyclique multiplex de coupes de tissus cancéreux

Pour commencer, procurez-vous des lames préalablement préparées contenant des coupes de tissus cancéreux. Préparez un mélange fonctionnel d’anticorps primaires. Ajouter le complexe d’anticorps sur la section de la lame et incuber pendant une heure à température ambiante.

Ensuite, lavez la diapositive trois fois avec 0,1 % de PBS d’entrejambe pendant cinq minutes. Préparez un mélange d’anticorps secondaires fluorescents. Ajoutez-le goutte à goutte sur la lame et incubez-le à température ambiante pendant une heure.

Effectuez ensuite une deuxième série d’incubation primaire d’anticorps à température ambiante pendant une heure. Lavez la diapositive trois fois avec 0,1 % de PBS pendant cinq minutes chacune. Et à l’aide d’un papier filtre, retirez l’excès d’eau du périmètre du tissu.

De même, effectuez une deuxième série d’incubation secondaire d’anticorps et lavez-les comme démontré précédemment. Maintenant, ajoutez le réactif de permanganate de potassium au tissu. Après une minute, rincez-le à l’eau courante pendant cinq minutes.

Effectuer une déshydratation avec des concentrations croissantes d’alcool. Enfin, ajoutez un DAPI pour couvrir complètement la coupe de tissu et placez une lamelle pour l’imagerie multispectrale. L’imagerie par immunofluorescence multiplex a indiqué la présence de cellules CD trois positives, CD huit positives et CD 20 positives dans les tissus de métastases cérébrales du cancer du poumon.