Commencez par disposer tout le matériel nécessaire à l’expérience sur la plate-forme de travail. Après avoir extrait les ovaires de la souris, placez-les dans un milieu d’albumine sérique bovine M2 plus préchauffé complété par une milrinone micromolaire. Perforer les follicules ovariens avec des aiguilles chirurgicales pour libérer les ovocytes en croissance des follicules antraux.
À l’aide d’une micropipette, prélevez des ovocytes de la taille nécessaire aux expériences. Transférez ensuite les ovocytes dans un plat avec du milieu frais. Transférez les ovocytes de goutte en goutte à l’aide de la micropipette.
Cela permet la dissociation mécanique des ovocytes des cellules folliculaires antrales. Stabiliser l’ovocyte pendant une heure à 37 degrés Celsius. Centrifuger les aliquotes d’ARNc, enrobage pour YFP-Rango et SRSF2 GFP.
À l’aide d’un micro-injecteur, injecter de l’ARNc dans le cytoplasme des ovocytes dans un milieu chaud M2 plus albumine sérique bovine, complété par de la milrinone. Incuber les ovocytes pendant deux heures dans un milieu de culture à 37 degrés Celsius pour la traduction de l’ARNc. Ensuite, déposez les ovocytes dans des gouttelettes de milieu de culture sur une boîte de culture tissulaire de 35 millimètres avec une chambre à fond en verre recouverte d’huile minérale.
