Pour commencer, prenez la grenouille qui a été immergée dans la solution d’euthanasie pendant une heure et pincez son pied pour vérifier l’absence de réponse à la douleur. Pesez le xénope et prenez des mesures supplémentaires telles que la longueur du museau au cloaque. Placez la grenouille sur son dos et fixez ses membres près du corps.
À l’aide de ciseaux de dissection, faites une incision à travers la peau le long de la ligne médiane, puis étendez-la latéralement pour créer deux lambeaux cutanés. Localisez ensuite la linea alba et saisissez-la avec une pince. Retirez-le doucement de la cavité cœlomique et, à l’aide de ciseaux, coupez la musculature sous-jacente.
Créez deux rabats à partir de la paroi de la cavité. Identifiez le cœur qui bat encore et utilisez des ciseaux de dissection pour couper les os coracoïdes afin d’en faciliter l’accès. Utilisez maintenant une pince à tissu pour identifier le péricarde mince et l’étirer.
À l’aide de la pointe des ciseaux d’iridectomie, perforez soigneusement le péricarde. Retirez ensuite le péricarde des trois cavités du cœur. Dans ce protocole, l’échantillonnage du ventricule cardiaque, du lobe gauche du foie, du pancréas, du corps adipeux et des reins appariés est montré.
Pour prélever un échantillon du ventricule cardiaque, saisissez le ventricule à l’apex à l’aide d’une pince, localisez sa connexion aux oreillettes et au tronc artériel, puis sectionnez-le en dessous de ces points. Ensuite, observez les trois lobes du foie. Soulevez doucement le lobe gauche pour exposer les canaux hépatiques et kystiques, et prélevez un tiers de ce lobe sous les canaux.
Si la grenouille est une femelle, localisez l’ovaire recouvert par l’épithélium germinal. Repositionnez doucement les lobes de chaque côté pour révéler la zone d’attache. Utilisez des ciseaux pour exciser les ovaires le plus près possible des reins sans les endommager.
Examinez ensuite le lobe médial du foie et ses connexions à l’estomac et au duodénum à travers le mésentère et le canal hépatopancréatique. À l’aide de ciseaux d’iridectomie, coupez le mésentère, le ligament hépatoduodénal et le canal hépatopancréatique près du duodénum. Détachez le pancréas et le canal du lobe médial du foie sans laisser de tissu hépatique foncé attaché.
Ensuite, tenez l’estomac à l’aide d’une pince dentée, puis utilisez une pince à tissus pour maintenir l’extrémité supérieure du pancréas. Sous un grossissement de 5X, séparez soigneusement le pancréas de l’estomac. Maintenant, localisez et excisez la vessie, en coupant aussi près que possible du cloaque, puis jetez le tissu.
Après cela, identifiez le gros intestin et étirez-le, en le sectionnant près du cloaque. Ensuite, séparez les corps adipeux de chaque côté, saisissez la base du corps adipeux gauche et coupez-le du péritoine. Dans le cas de grenouilles femelles ou de mâles avec des oviductes vestigiaux visibles, tenez un oviducte et séparez-le du rein et du cloaque.
Coupez à la jonction du cloaque et continuez à le détacher du rein, en enlevant toutes les attaches péritonéales claires. Maintenant, utilisez des pinces pour tenir les reins et coupez le péritoine à leur extrémité inférieure. Soulevez les reins de la cavité cœlomique à l’aide de ciseaux.
Détachez le péritoine le plus près possible des reins sans causer de dommages. Sous un grossissement de 5X, retirez tout excès de péritoine et les tissus résiduels tels que les testicules, les corps adipeux ou la rate. Après avoir relâché l’animal, placez-le sur son ventre et sécurisez ses membres.
Choisissez un membre postérieur pour l’échantillonnage et fixez son pied. Excisez un lambeau de peau en forme d’amande sur la zone gastrocnémien ou tibiofibulée. Ensuite, rincez tous les échantillons dans du PBS, vérifiez qu’il n’y a pas d’excès de tissus et coupez avant utilisation si nécessaire.
Le ventricule cardiaque, le lobe gauche du foie, le pancréas, les corps adipeux gauches, les reins appariés et un lambeau de peau ont été proprement excisés dans l’heure qui a suivi l’euthanasie.
