Pour commencer, transférez 44 millilitres de milieu de base dans un tube à centrifuger de 50 millilitres. Ajoutez 5 millilitres de 10 % FBS au support. Ensuite, pipetez 0,5 millilitre de pénicilline, de streptomycine et d’amphotéricine B.
Centrifuger un flacon contenant une solution rapide de Dexstran à 1000 G pendant 30 secondes à 20 degrés Celsius. Ajouter 175 microlitres d’eau dans le flacon pour obtenir une concentration finale de 30 millimoles par litre. Faites tourbillonner le tube pendant 30 secondes à vitesse moyenne jusqu’à ce que le matériau soit complètement dissous.
Incuber la matière dissoute sur de la glace pendant cinq minutes. Centrifugez le tube avant de faire tourbillonner à nouveau son contenu. Placez ensuite le tube sur de la glace jusqu’à nouvel ordre.
Ensuite, centrifugez le réticulant pour concentrer le matériau. Pipeter 188 microlitres d’eau dans le flacon de réticulation pour obtenir une concentration finale de 20 millimoles par litre de groupes thiols. Agiter la solution de réticulation jusqu’à ce que tout le matériau soit dissous.
Centrifuger le tube après l’incubation. Ensuite, agitez brièvement avant de le placer à température ambiante jusqu’à nouvel ordre. Ensuite, préparez la suspension de cellules souches dérivées du tissu adipeux pour 10 microlitres d’hydrogel comme indiqué dans le tableau pour créer un mélange maître.
Transvaser neuf microlitres de mélange principal dans un puits dans une plaque de bande de 96 puits. Après trois minutes, ajoutez un microlitre de réticulant dégradable au mélange pour solidifier le gel. Pipette. 170 microlitres de milieu de culture complet préchauffé sur les hydrogels.
Remplacez le milieu de culture après l’incubation.
