Pour commencer, configurez le système laser à diode pour la longueur d’onde verte. Allumez les lasers et laissez-les se réchauffer pendant la durée recommandée. Une fois que les lasers ont atteint un état stable et stabilisés, utilisez un wattmètre laser pour mesurer la puissance de sortie des lasers.
Enregistrez les valeurs de puissance pour chaque longueur d’onde. Après avoir remplacé le milieu complet, placez la plaque de puits contenant des cellules souches dérivées du tissu adipeux intégrées dans l’hydrogel sous le système laser à diode, irradiez les hydrogels avec le temps d’irradiation laser calculé pour la fluidité sélectionnée à la longueur d’onde choisie. S’assurer que chaque groupe expérimental dispose d’un témoin non irradié.
Incuber les plaques de culture à 37 degrés Celsius sous une supplémentation en dioxyde de carbone de 5 % et une humidité de 85 %. Ensuite, diluez la solution enzymatique de récupération cellulaire avec du PBS dans un rapport de un à 20 pour préparer une solution de travail. Ajoutez 30 microlitres de la solution de travail à chaque gel ou puits contenant les cellules à récupérer.
Balancez ou faites tourner doucement la plaque pour permettre une répartition uniforme de la solution de récupération. Incuber la plaque avec la solution de récupération pendant 45 minutes. Après l’incubation, retirez délicatement la plaque de l’incubateur, centrifugez les plaques à 1 409 G pendant cinq minutes à 20 degrés Celsius pour granuler les cellules.
Ensuite, jetez soigneusement le surnageant sans perturber la pastille cellulaire. Pipeter 220 microlitres de PBS stérile dans la pastille. Assurez-vous d’un mélange complet pour obtenir une suspension homogène à cellule unique.
Les cellules souches dérivées du tissu adipeux ont conservé une morphologie arrondie 24 heures après l’ensemencement et l’exposition à la photobiomodulation. Les cellules étaient dispersées dans le gel sous forme de cellules simples ou en grappes ressemblant à des raisins. La morphologie est restée inchangée après 10 jours en culture 3D.
