Analyse de la fonction mitochondriale dans de petites colonies de Candida glabrata induites par le fluconazole

Pour commencer, placez la culture de Candida glabrata et le milieu YPD sur une plate-forme de travail. Ajustez la densité optique de la suspension des cellules de levure à 600 nanomètres à 0,1 avec un milieu YPD. Transférez un millilitre de suspension cellulaire dans un tube de cinq millilitres.

Trempez un coton-tige stérile dans la suspension de cellules de levure. Écouvillonnez le coton d’avant en arrière sur la plaque de gélose Mueller Hinton, en tournant deux fois à 60 degrés. Ensuite, frottez le périmètre pour une couverture uniforme.

Divisez la plaque en trois secteurs égaux à l’aide d’un marqueur. Stérilisez la pince à feu pendant une à deux secondes. Après le refroidissement, placez un disque vierge au centre de chaque secteur.

Ajoutez 12,5 microlitres de bouillon de fluconazole dans chaque disque. Bien mélanger pour éviter les bulles et incuber à 37 degrés Celsius pendant 20 à 24 heures. Le lendemain, ajoutez 20 microlitres de chlorure de triphényltétrazolium à 20% directement au centre de chaque colonie.

Incuber l’assiette à 37 degrés Celsius pendant 30 à 40 minutes. Numérisez la plaque à 1200 DPI à l’aide d’un scanner optique couleur 48 bits. Le traitement au fluconazole induit efficacement de petits mutants de C. glabrata.

Une zone circulaire claire de non-croissance entourait le disque de fluconazole dans la culture T zéro, indiquant une moindre résistance aux médicaments chez le champignon parental. Dans la culture T trois, de nombreuses petites colonies se sont formées près du disque, suggérant une résistance aux médicaments après trois traitements de thérapie photodynamique répétés.