Culture hydroponique de plants d’Arabidopsis thaliana pour les inoculations bactériennes

Pour préparer le milieu de culture pour les semis d’Arabidopsis thaliana, mélangez un milieu demi-fort Murashige et Skoog ou MS avec 2 % de saccharose et 0,9 % de gélose. Après la stérilisation, versez le milieu dans une boîte de Pétri carrée en veillant à éviter le dessèchement à l’air pour maintenir l’humidité. Plongez les graines d’Arabidopsis dans un micro-tube à centrifuger de deux millilitres contenant un millilitre d’eau stérile à quatre degrés Celsius pendant plus de 12 heures.

Ensuite, stérilisez les graines avec un millilitre de solution d’hypochlorite de sodium à 2% pendant deux minutes. Lavez soigneusement les graines six fois avec de l’eau stérile pour éliminer la solution d’hypochlorite de sodium. À l’aide d’un embout stérile d’un millilitre, semez les graines sur la plaque de gélose MS.

Scellez la boîte de Pétri avec du ruban adhésif médical respirant et placez-la verticalement dans un incubateur léger pendant une semaine à 28 degrés Celsius avec une humidité comprise entre 40 et 60 % Faites des trous de cinq millimètres sur une crépine de 40 microns et stérilisez-la à 115 degrés Celsius pendant 30 minutes. Après le tirage, transplantez trois plantes A thaliana de sept jours à travers les trous d’une passoire cellulaire et placez-les dans une plaque à six puits contenant trois millilitres de milieu MS demi-fort avec 0,5% de saccharose.