Évaluation quantitative de la colonisation de Bacillus velezensis sur les racines d’Arabidopsis thaliana

Pour commencer, pesez des tubes de deux millilitres et notez le poids initial en w0. Récoltez les tissus racinaires d’Arabidopsis thaliana et lavez-les trois fois dans de l’eau stérile. Placez la racine sur du papier filtre pour enlever l’excès d’eau.

Transférez les racines dans le micro-tube à centrifuger pré-pesé. Pesez les racines avec le tube et notez-le comme w1. Ensuite, ajoutez 1 millilitre de PBS dans le tube et vortex pendant huit minutes à vitesse maximale.

Diluez les suspensions contenant les cellules bactériennes colonisées par la racine de 1 par 10 à moins 1 à 1 par 10 à moins 5. Étalez les suspensions bactériennes diluées sur des plaques de gélose Luria-Bertani et incubez à 37 degrés Celsius pendant 10 heures. Après l’incubation, comptez les colonies bactériennes sur des plaques de gélose Luria-Bertani.

Calculez les unités formant colonie en fonction de la dilution correspondante, et normalisez les données avec le poids frais de la racine pour obtenir un nombre de cellules bactériennes colonisées par gramme de racine. Deux jours après l’inoculation, la colonisation de Bacillus velezensis de type sauvage SQR9 et d’un mutant dérivé, delta 8mcp, a démontré une réduction significative de la colonisation racinaire de delta 8mcp, ce qui suggère l’efficacité de cette condition et de cette méthode pour mesurer la colonisation bactérienne.