Pour commencer, disposez tout le matériel nécessaire au passage des entéroïdes intestinaux humains, ou HIE, sur la plate-forme de travail. Mélanger les HIE avec une matrice de culture 3D à facteur de croissance réduit. Semez le mélange sur une plaque de 24 puits avec trois gouttelettes de 10 microlitres de matrice de culture 3D par puits et incubez pendant 20 minutes à 37 degrés Celsius.
Ajoutez ensuite 350 microlitres de milieu de croissance HIE. Après sept jours, collectez les HIE de quatre puits dans des tubes de 1,5 millilitre. Centrifugez les HIE à 2000 g pendant 40 secondes pour éliminer les débris.
À l’aide d’une pipette, retirez la matrice de culture 3D excédentaire du tube. Ajoutez 0,5 millilitre de PBS froid dans le tube. À l’aide d’une seringue à insuline d’un millilitre, appliquez des turbulences physiques en seringue jusqu’à 10 fois pour dissocier les HIE.
Centrifugez les HIE dissociés à 2000 g pendant 40 secondes et retirez doucement le surnageant. Placez ensuite le tube sur de la glace pendant environ trois minutes. Ajoutez une matrice de culture 3D à facteur de croissance réduit dans le tube et mélangez-la avec la pastille.
Ensemencez le mélange d’HIE dans la matrice de culture 3D au centre d’une parabole ronde de 35 millimètres. Incuber la parabole à 37 degrés Celsius pendant 20 minutes pour solidifier la matrice de culture 3D. Ajoutez ensuite deux millilitres de milieu de croissance organoïde intestinal préchauffé dans le plat et incubez à 37 degrés Celsius avec 5% de dioxyde de carbone pendant 48 heures.
Le troisième jour, remplacez le milieu de culture par deux millilitres de milieu de différenciation préchauffé et incubez à 37 degrés Celsius avec 5% de dioxyde de carbone pendant 48 heures. Le cinquième jour, remplacer le milieu d’entéroïdes par deux millilitres de milieu de différenciation préchauffé et poursuivre l’incubation pendant 24 heures.
