Environ 48 heures après la transfection des cellules HEK 293, lavez les cellules trois fois avec du PBS glacé. Ajoutez 500 microlitres de tampon de lyse des protéines contenant des inhibiteurs de protéase dans le plat. Collectez les cellules à l’aide d’un grattoir cellulaire et ajoutez-les dans un tube à faible absorption de protéines sur de la glace.
Agitez le tube toutes les cinq minutes et poursuivez l’incubation sur glace pendant 10 minutes. Centrifuger les échantillons à 16, 400G pendant 10 minutes à 4 degrés Celsius. Prélevez le surnageant et transférez-le dans un tube frais de 1,5 millilitre à faible absorption de protéines.
Après avoir déterminé la concentration en protéines, séparez 200 à 1 000 microgrammes de protéines dans un tube frais. Ajouter un tampon de lyse des protéines pour ajuster le volume final entre 500 et 1 000 microlitres.
