Pour commencer, inoculez une seule colonie OP50 dans cinq millilitres de LB avec de l’ampicilline et de l’amphotéricine B et incubez pendant environ six heures à 37 degrés Celsius dans un agitateur bactérien. Une fois que la culture devient trouble, diluez la culture de préinoculum d’OP50 de 1 à 2 000 dans 250 millilitres de TB avec de l’ampicilline et du glycérol. Transférez ensuite la culture liquide OP50 dans un tube de centrifugation stérile.
Centrifugez le tube pendant 15 minutes à 3,100 G dans une centrifugeuse de table à quatre degrés Celsius. Jetez le surnageant et remettez en suspension la pastille OP50 dans de l’eau stérile avant la recentrifugation. Après le deuxième lavage, jetez le surnageant et remettez en suspension la pastille OP50 dans de l’eau stérile jusqu’à un volume de 50 millilitres.
Transférez-le dans un tube conique pré-pesé de 50 millilitres. Centrifugez le tube pendant 20 minutes pour granuler l’OP50. À la fin de la centrifugation, retirez soigneusement tout surnageant restant, en veillant à ce qu’il ne reste pas d’eau dans le tube.
Calculez le poids de la pastille en soustrayant le poids du tube de centrifugation vide du poids du tube de centrifugation avec la pastille. Remettez complètement en suspension la pastille OP50 dans le tampon S-complete pour obtenir une concentration de 100 milligrammes par millilitre. Testez la suspension OP50 sur une plaque de gélose pour vérifier qu’il n’y a pas de contamination.
Stockez la suspension OP50 dans un tampon S-complete à quatre degrés Celsius.
