Pour commencer, insérez le bas d’une pointe de pipette coupée de 200 microlitres dans un dispositif de piégeage microfluidique préfabriqué. À l’aide d’une seringue équipée d’un filtre de 0,2 micromètre, injectez 400 microlitres de solution de caséine bêta dans le réservoir d’entrée de la puce. Centrifugez la puce à 900 G pendant six minutes.
Le niveau de liquide doit maintenant être égal à l’entrée et à la sortie. Dessinez le contour de l’entretoise sur deux diapositives d’objectif. Nettoyez les lames avec un plasma à haute teneur en oxygène pendant une minute pour les rendre hydrophiles.
Ajoutez de l’agarose à basse température de gélification sur le dessus de la lame jusqu’à ce qu’elle soit entièrement recouverte d’agarose. Ensuite, inclinez la glissière à un angle de 90 degrés et égouttez l’excès d’agarose sur un mouchoir. Placez les lames à 50 degrés Celsius pendant 30 minutes.
À l’aide d’un sonificateur à sonde portatif, équipé d’une sonde d’un millimètre, sonicez les protéoliposomes préparés. Gardez les SUV proteo sur la glace pendant 30 secondes avant de répéter la sonication cinq fois. À l’aide d’une seringue de 100 microlitres, déposez des gouttelettes de 0,5 microlitre des SUV proteo sur un gel d’agarose préparé.
Utilisez un flux d’azote pendant environ 10 minutes pour sécher les gouttelettes. À l’aide d’une seringue et d’une aiguille, pipetez la solution gonflante dans une chambre préparée à travers un petit trou sur le côté et laissez les vésicules gonfler à 22 degrés Celsius pendant au moins 30 minutes. Tapotez la chambre sur une surface solide pour récolter les GUV du gel.
Pour piéger les GUV pour la microscopie, montez une puce microfluidique passivée sur un microscope. Après avoir vérifié s’il y a des défauts, connectez le tube avec une aiguille pliée à la sortie du réservoir. Après avoir connecté l’autre extrémité à une seringue d’un millilitre, montez la seringue sur une pompe avec un débit maximal de 10 microlitres par minute.
Remplacez le tampon de lavage du réservoir par un fluide frais. Laver avec au moins 80 microlitres de tampon P.Après avoir retiré l’excès de tampon, ajoutez les proteo GUVs dans le réservoir. Surveillez la puce au fil du temps jusqu’à ce qu’un nombre suffisant de GUV aient été piégés dans la puce.
Pipetez l’excès de solution GUV. Ajoutez ensuite le tampon de lavage P à un débit de 0,1 à un microlitre par minute. Enfin, localisez les pièges avec une quantité suffisante de vésicules.
Après avoir appliqué les paramètres au microscope, ajoutez le tampon R dans le réservoir à un débit de 0,5 microlitre par minute. La réhydratation de LUV protéo séchés sur un gel d’agarose à basse température de gélification a entraîné la formation de vésicules de taille micrométrique. Les GUV ont été récoltés et piégés dans un dispositif microfluidique passivé à la caséine bêta.
