Après avoir anesthésié et retiré les poils de la souris, placez-la sur un coussin chauffant enveloppé dans un tapis chirurgical autoclave. Redressez doucement le corps et soulevez la peau le long de la colonne vertébrale. À l’aide d’un marqueur chirurgical, dessinez un seul point sur un côté de la souris, au centre de la peau de la tente.
Après avoir cultivé le BXPC, trois lignées cellulaires de cancer du pancréas humain pendant deux semaines. Retirez la fiole de l’incubateur et placez-la dans l’enceinte de sécurité biologique. Aspirez le milieu et lavez les cellules avec cinq millilitres de PBS.
Ajoutez cinq millilitres d’agent de dissociation cellulaire dans le ballon et incubez à 37 degrés Celsius avec 5% de dioxyde de carbone pendant six à sept minutes. Transférez la suspension cellulaire dans un tube de 15 millilitres et centrifugez à 500 G pendant cinq minutes. Après avoir retiré le surnageant, remettez les cellules en suspension dans un milieu de croissance complet.
À l’aide d’un hémocytomètre, déterminez la concentration cellulaire et le nombre total de cellules. Centrifugeuse en suspension de 1,5 millilitre contenant 250 000 cellules par souris à inoculer à 500 G pendant cinq minutes. Après avoir retiré le surnageant, remettre la pastille en suspension dans 10 microlitres de PBS par souris à inoculer et placer le tube sur de la glace.
À l’aide d’embouts de pipette réfrigérés, ajoutez une membrane basale solubilisée dans le tube. Chargez l’aiguille d’insuline réfrigérée de calibre 29 avec 20 microlitres de suspension cellulaire et placez la seringue sur de la glace. Insérez l’aiguille d’environ un centimètre de dorlotement jusqu’au point de repère de la souris et déplacez l’aiguille sous la peau jusqu’à ce qu’elle soit au point de repère, avec le côté biseauté de l’aiguille vers le haut.
Injectez 20 microlitres de suspension cellulaire et attendez 45 secondes avant de retirer la seringue. Après avoir retiré la souris de l’anesthésie, attendez qu’elle devienne ambulatoire avant de retourner dans sa cage d’origine.
