Recrutement de mOrange-Nano dans des bicouches lipidiques (SLB) fonctionnalisées disiLID pour la génération de motifs protéiques

Pour commencer, prenez une chambre à fond en verre de 18 puits, ajoutez 150 microlitres d’hydroxyde de sodium dans chaque puits de la chambre et incubez pendant une heure à température ambiante. Ensuite, retirez la solution d’hydroxyde de sodium et lavez les puits trois à cinq fois avec de l’eau désionisée, puis trois lavages avec un tampon contenant 10 millimolaires de chlorure de calcium. Ensuite, ajoutez 15 microlitres de SUV fraîchement préparés dans les puits contenant 150 microlitres de tampon avec 10 millimolaires de chlorure de calcium.

Après 30 minutes d’incubation à température ambiante, laver les SLB au moins sept fois avec un tampon qui ne contient pas de chlorure de calcium. Pour la fonctionnalisation des SLB biotinylés avec de la streptavidine, ajouter une solution de streptavidine. Ensuite, lavez les SLB au moins cinq fois avec un tampon pour éliminer l’excès de streptavidine.

Ensuite, ajoutez b-disiLID à une concentration finale d’une micromolaire dans le puits. Après 30 minutes d’incubation à température ambiante, lavez l’excès de protéines avec un tampon au moins cinq fois. Ajoutez ensuite mOrange-Nano à une concentration finale de 200 nano molaires.

Couvrez l’échantillon de papier d’aluminium et gardez-le dans l’obscurité. Ensuite, placez la microlame sous le microscope à fluorescence. Réglez le laser de 552 nanomètres pour visualiser mOrange-Nano.

La microscopie à fluorescence a révélé que mOrange-Nano était structuré sur les SLB fonctionnalisés avec b-disiLID. Après l’activation de la photo, il y a une augmentation rapide du signal de fluorescence dans le canal orange dans la région d’intérêt. La fluorescence de mOrange-Nano augmente après chaque activation photo, sature en 120 secondes, puis diminue jusqu’aux niveaux de fond dans les 120 secondes suivantes.