Préparation de vésicules unilamellaires géantes (GUV) pour la fabrication de motifs protéiques réversibles régulés par la lumière

Pour commencer, préparez une solution à 5% d’alcool polyvinylique avec 100 millimolaires de saccharose dans de l’eau ultrapure. Mélanger toute la nuit à 80 degrés Celsius tout en secouant à 400 tr/min. Préparez ensuite une solution lipidique de chloroforme avec la composition souhaitée.

Pour se préparer, les GUV utilisent une pointe de pipette pour étaler une fine couche de 40 microlitres de la solution d’alcool polyvinylique préparée sur une lame de verre. Séchez cette couche à 50 degrés Celsius pendant 30 minutes. Ensuite, à l’aide d’une aiguille, étalez cinq microlitres de solution lipidique sur la couche d’alcool polyvinylique et laissez-la sécher à 30 degrés Celsius pendant une heure.

Utilisez maintenant une entretoise et une deuxième lame de verre pour assembler une chambre sur la lame de verre fonctionnalisée, ajoutez un millilitre de tampon de réhydratation dans la chambre et incubez pendant une heure à température ambiante pour former des GUV. Ensuite, retournez la chambre et tapochez doucement sur les surfaces vitrées. Retirez délicatement la lame de verre d’un côté pour ouvrir la chambre construite et récoltez les GUV à l’aide d’une pipette.

Placez la solution dans un tube en plastique et laissez les GUVs se déstabiliser pendant deux heures.