Pour commencer, pipetez 1,2 millilitre d’une culture de 24 heures de Pseudomonas aeruginosa dans un tube à centrifuger de 1,5 millilitre. Centrifugez le tube à 3000 G pendant quatre degrés Celsius pendant trois minutes. Recueillir le surnageant dans un tube propre.
Pipeter 333 microlitres du surnageant dans un tube propre. Ajoutez ensuite un millilitre d’éther dans le tube. Mélangez la solution dans un vortex pendant 30 secondes.
Une fois que tous les tubes ont été vortex, centrifugez-les à 3000 G à quatre degrés Celsius pendant deux minutes. Ensuite, récupérez la phase organique et transférez-la dans un tube propre Placez la solution dans une hotte d’extraction jusqu’à ce qu’elle soit sèche.
Ensuite, placez un flacon propre recouvert de papier d’aluminium dans de la glace pendant cinq minutes pour préparer une solution d’acide sulfurique à 60 %. Utilisez cette solution d’acide sulfurique pour préparer le réactif d’orcinol. Ajoutez 100 microlitres de chaque échantillon de Rhamnolipide dans un tube en verre et ajoutez 900 microlitres d’orcinol aux échantillons.
Après avoir mélangé les solutions, incubez l’échantillon dans un bain-marie à 80 degrés Celsius pendant 30 minutes. Lorsque le tube refroidit à température ambiante, transférez un échantillon dans une cellule d’un quart et placez-le dans le spectrophotomètre pour lire l’absorbance à 421 nanomètres. La souche PA14 produit la plus grande quantité d’équivalents de rhamnose, tandis que la souche PA7 en produit la plus faible.
