Préparation d’échantillons et de mélanges maîtres pour la mesure de la longueur des télomères à l’aide de la PCR quantitative multiplex monochrome (MMqPCR)

Commencez par ajouter des échantillons d’ADN génomique extraits de cellules mononucléées de sang périphérique aux bandelettes PCR A, B et C respectivement. Ensuite, faites tourbillonner l’aliquote d’ADN contrôlée décongelée pendant 30 secondes. Après avoir brièvement centrifugé le tube, aspirez tout le volume dans le premier tube de la bande de tubes PCR à courbe standard.

Ensuite, ajoutez 70 microlitres d’eau de qualité PCR dans le deuxième à travers huit tubes de la bandelette PCR à courbe standard. Ensuite, réintroduisez l’ADN de contrôle dans le premier tube et aspirez 70 microlitres dans le deuxième tube. Attendez 30 secondes et remettez la solution en suspension dans le deuxième tube.

Récupérez les réactifs du mélange maître et laissez-les atteindre la température ambiante dans la hotte PCR. Ajoutez ensuite un microlitre de l’aliquote cyber green à l’aliquote tampon. Vortex toutes les aliquotes pendant 10 secondes et centrifugez-les pendant cinq secondes.

Ajoutez ensuite les quantités spécifiées de tous les réactifs et amorces du mélange maître dans le tube de bétaïne de cinq millilitres. Après avoir retiré l’ADN polymérase à moins 20 degrés Celsius, agitez-la pendant 10 secondes, puis centrifugez-la pendant cinq secondes. Une fois centrifugé, ajoutez lentement 128 microlitres au mélange maître.

Agitez le tube de mélange principal de cinq millilitres pendant 30 secondes, puis mettez-le de côté.