Pour commencer, placez deux plaques de 96 puits, une auge de chargement et des pointes de pipette multicanaux à l’intérieur du capot PCR. Après avoir étiqueté chaque plaque, tournez la plaque de 1 180 degrés de manière à ce que les numéros de colonne soient à l’envers tout en laissant la plaque 2 face au technicien. Versez ensuite le tube de cinq millilitres du mélange maître MM qPCR préparé dans l’auge de chargement.
Utilisez une pointe de pipette pour vous assurer que toute la solution du tube est transférée. Fixez les pointes à la pipette multicanaux, en appuyant à la base de chaque pointe pour assurer une fermeture étanche. À l’aide du pipetage inversé, distribuez d’abord le mélange principal dans toutes les colonnes paires ou toutes impaires, en alternant entre les deux plaques.
Après avoir vortex et centrifugé les bandelettes PCR, disposez-les dans le rack de tubes dans l’ordre dans lequel elles seront placées sur les plaques. Tournez maintenant les deux plaques de 180 degrés de sorte que les numéros de colonne soient inversés par rapport au technicien. Utilisez la pipette multicanaux pour remettre les solutions en suspension dans les bandelettes PCR.
À l’aide du pipetage inverse, remplissez les trois premières colonnes de chaque plaque avec la bandelette PCR A, en alternant entre les colonnes paires ou impaires comme le placement du mélange principal. À l’aide d’une pipette de 200 microlitres réglée sur 90 microlitres, remettre complètement en suspension le septième tube de dilution étalon dans la bandelette PCR S et remplir les quatrième à sixième colonnes sur les plaques. Après avoir rempli les plaques, tapotez-les doucement sur le dessus de la paillasse pour vous assurer que le liquide dans les puits se dépose au fond.
Recouvrez ensuite le dessus des plaques de films d’étanchéité, en appuyant du bout des doigts sur tous les bords du film pour assurer une étanchéité parfaite. Pour mélanger le contenu des assiettes, faites-les tourner sur le dessus de la hotte pendant 30 secondes. Placez ensuite les plaques scellées dans la toupie pendant deux minutes avec les ouvertures du puits vers le centre.
Placez maintenant les plaques dans le thermocycleur en veillant à ce que les numéros de colonne soient lisibles. Nettoyez le haut de chaque plaque avec un mouchoir propre avant de fermer le dessus du thermocycleur. Cliquez ensuite sur le bouton Démarrer la course sur le logiciel du thermocycleur pour les deux machines.
Lorsque vous y êtes invité, entrez un titre pour les fichiers d’analyse, qui seront utilisés pour étiqueter et suivre les données de cette expérience.
