Pour commencer, identifiez les souris femelles immunodéficientes NSG, atteintes de la maladie leptoméningée, ou LMD. Placez une souris anesthésiée sur la table d’opération. Positionnez le nez de la souris dans un cône modifié en forme de L d’un appareil stéréotaxique, en veillant à ce que les narines ne soient pas obstruées.
Tirez doucement la peau vers l’avant sur les surfaces ventrales des deux pavillons, puis fixez-la au cône nasal avec du ruban adhésif. Guidez les pointes des ciseaux chirurgicaux vers le bas à partir des pavillons à travers l’os occipital. Créez une petite incision médiane de cinq à sept millimètres juste au-dessus de la concavité palpée.
À l’aide d’une paire de pinces à pointe émoussée ayant des pointes d’un à deux millimètres, appliquez doucement une pression sur la citerne magna. Introduisez les pointes en position fermée et ouvrez-les tout en exerçant une pression vers le bas sur la dure-mère. Continuez à effectuer une dissection contondante jusqu’à ce que la membrane durale soit clairement discernable et que les vaisseaux sanguins associés soient visibles dans la zone exposée.
Gardez maintenant la pince ouverte pour rétracter la musculature environnante. Fixez ensuite une aiguille de calibre 27 à 29 à une seringue d’un millilitre. Insérez la seringue sous la dure-mère pour visualiser le biseau.
Rétractez progressivement le piston de la seringue pour recueillir autant de liquide céphalo-rachidien que possible. Transférez le liquide dans un tube de microcentrifugation. Placez-le immédiatement sur de la glace.
Centrifugez l’échantillon à 257 g pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius. Après avoir aspiré le surnageant, pipeter 500 microlitres de PBS stérile sur la pastille de cellule. Centrifugez la pastille à 257 g pendant cinq minutes à température ambiante.
Jetez le surnageant, puis transférez la pastille dans une plaque à 96 puits contenant un milieu conditionné HMC.
