Extraction d’ADN à partir d’échantillons d’expectorations humaines pour la détection rapide d’agents pathogènes bactériens à l’aide d’une puce microfluidique

Pour commencer, nettoyez la cavité buccale et les dents avec de l’eau propre. Demandez aux patients portant des prothèses dentaires de les enlever. Demandez au patient de tousser avec force pour expulser les expectorations respiratoires profondes dans un récipient d’expectorations.

Pour extraire l’ADN, ajoutez un volume approprié de 10 % d’hydroxyde de sodium à l’échantillon en fonction de sa viscosité. Vortex la suspension pendant 15 secondes, puis incubez-la à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes pour liquéfier l’échantillon. Ensuite, pipetez un millilitre de l’échantillon liquéfié dans un tube à centrifuger de 1,5 millilitre.

Centrifuger l’échantillon à 15 777 G pendant cinq minutes à deux à six degrés Celsius. Ensuite, pipetez le surnageant pour le jeter. Maintenant, ajoutez un millilitre de solution de lavage dans le tube et tourbillonnez-le pour soulever le précipité du fond du tube.

Après avoir centriféré et jeté le surnageant comme précédemment, pipetez 100 microlitres de solution d’extraction d’acide nucléique sur la palette. À l’aide d’une pipette, aspirez et mélangez soigneusement le précipité avec la solution. Transférez le liquide et précipitez ensemble dans un tube d’extraction d’acide nucléique.

Placez le tube dans un mélangeur vortex à vitesse moyenne pendant cinq minutes. Ensuite, transférez le tube dans un bain métallique à une température constante de 100 degrés Celsius pendant cinq minutes. Enfin, centrifugez les échantillons à 15 777 G pendant cinq minutes à deux à six degrés Celsius avant de poursuivre l’expérience.