Détection bactérienne d’échantillons d’expectorations humaines dans les voies respiratoires inférieures à l’aide d’une puce microfluidique

Pour commencer, agitez doucement un réactif d’amplification isotherme décongelé. Centrifugez le réactif pour le récupérer entièrement au fond du tube. Pipeter 20 microlitres du réactif d’amplification isotherme dans un tube à centrifuger préparé de 200 microlitres.

Couvrez le tube avec son couvercle et transférez-le dans la zone de préparation de l’échantillon. Ajoutez maintenant 34,5 microlitres de l’échantillon d’acide nucléique cible dans chaque tube. Agitez doucement pour bien mélanger.

Centrifugez brièvement les tubes pour prélever tous les échantillons au fond des tubes. Ensuite, écrivez le numéro d’échantillon sur l’étiquette d’emballage d’une puce, ouvrez la puce microfluidique avec l’étiquette d’emballage vers le haut. Placez la puce avec les orifices d’entrée et de sortie vers le haut.

Ensuite, à l’aide d’une pipette, prélevez 50 microlitres du système de réaction d’amplification préparé et ajoutez-le au canal principal de la puce par l’orifice d’entrée. Arrêtez d’ajouter lorsque le canal principal est rempli. Essuyez tout excès de liquide autour des orifices d’entrée et de sortie avec un chiffon non pelucheux.

Ensuite, cliquez sur le bouton ouvrir la barre d’état de l’analyseur d’acides nucléiques après qu’il ait été préchauffé. Placez la puce avec la face avant vers le haut sur le plateau, en veillant à ce que le petit cylindre de localisation émerge de l’espace central de la puce pour la fixer. Appuyez sur le bouton de fermeture du plateau pour insérer la puce dans l’analyseur d’acides nucléiques.

Entrez les informations de test de l’échantillon dans la zone d’informations sur l’échantillon de l’interface de détection. Ensuite, appuyez sur le bouton de détection de démarrage pour lancer la détection de l’échantillon. Le premier échantillon s’est avéré être infecté par Klebsiella pneumoniae, tandis que les échantillons deux et sept présentaient des infections polymicrobiennes.

Un indicateur positif était représenté par une courbe d’amplification présentant une forme en S, tandis qu’une ligne horizontale représentait un indicateur négatif.