Pour commencer, rincez la dent extraite avec une solution saline stérile pour éliminer tout sang. Coupez soigneusement la dent longitudinalement en deux morceaux à l’aide d’une fraise de fissure en carbure tout en irriguant avec une solution saline stérile. Ensuite, transportez la dent et sa pulpe intacte dans un milieu alpha-MEM stérile sur de la glace jusqu’au laboratoire de culture cellulaire et tissulaire.
Ensuite, placez l’échantillon de dent extrait dans une boîte de Pétri de culture stérile et rincez abondamment trois à quatre fois avec du PBS stérile. À l’aide d’une excavatrice bien aiguisée et d’une pince, retirez soigneusement le tissu de la pulpe de la cavité et nettoyez-le soigneusement avec du PBS stérile pour éliminer les traces de sang. Divisez maintenant la surface du plat en quatre parties en mettant 1 à 2 millilitres de PBS stérile dans chaque partie.
Placez l’échantillon de tissu pulpaire dans une zone et coupez-le en petits morceaux à l’aide d’une lame chirurgicale. Transférez les morceaux de tissu en les soulevant dans des zones successives avec du PBS. Pendant ce temps, ajoutez environ 0,8 à 1 millilitre d’alpha-MEM contenant des acides aminés non essentiels avec 10% de FBS et un cocktail d’antibiotiques dans une assiette à six puits.
Et déplacez-le pour répartir uniformément les médias. Différentes étapes du développement de la culture primaire de cellules souches de la pulpe dentaire sont présentées. Des cellules arrondies de type bulle du tissu dentaire ont été observées le deuxième jour de l’ensemencement.
Un réseau de cellules ressemblant à un désordre sortant des tissus a été observé le quatrième jour. Cependant, au 13e jour, le nombre de cellules qui ont émergé de l’explant a augmenté. Et à la fin de la deuxième semaine, la plupart des explants étaient entourés de nombreuses cellules adhérentes avec une morphologie en forme de fuseau.
