Commencez par positionner l’animal anesthésié sur la plate-forme chirurgicale. Appliquez une pommade oculaire lubrifiante sur les yeux de chaque animal pour éviter le dessèchement de la cornée pendant la chirurgie. Désinfectez le site chirurgical rasé avec trois cycles alternés de povidone iodée et d’isopropanol.
Placez ensuite un rouleau d’essuie-tout ou un tube de 1,5 centimètre de diamètre sous l’animal, juste rostral jusqu’aux hanches. Drapez l’animal avec un rideau fenestré, en centrant la fenestration sur la colonne lombaire pour un accès chirurgical. Pour vérifier la profondeur de l’anesthésie chez l’animal, pincez chaque patte et observez l’absence de réponse de retrait.
Ensuite, à l’aide d’une lame de scalpel numéro 11, faites une incision cutanée de trois centimètres de long le long de la ligne médiane des vertèbres L2 à L6. Insérez maintenant une paire de ciseaux chirurgicaux incurvés stériles entre le muscle et la peau, et ouvrez doucement les pointes pour séparer la peau du muscle sous-jacent. Retirez le fascia recouvrant les apophyses épineuses des vertèbres L2 à L5.
Pipeter 25 à 35 microlitres du vecteur AAV9 dans le capuchon d’un microtube à centrifuger stérile. Prélevez tout le volume du vecteur du capuchon dans la seringue à insuline. Identifiez ensuite les apophyses épineuses L5 et L4 sur l’animal.
Positionnez l’aiguille de la seringue à gauche de l’apophyse épineuse L5, en l’alignant avec l’extrémité caudale de l’apophyse. Avancez l’aiguille de la seringue d’environ huit millimètres vers l’avant sur la lame L5, puis sous la lame L4 dans la citerne lombaire jusqu’à ce qu’il y ait un contact avec l’os. Appuyez lentement sur le piston de la seringue pendant environ cinq secondes.
Retirez ensuite lentement l’aiguille du site d’insertion. À l’aide d’une suture 4-0 ou d’agrafes chirurgicales, commencez à fermer l’incision à une extrémité de la plaie. Pour évaluer le succès de l’injection de colorant, après l’euthanasie de l’animal, faites une incision de quatre centimètres de long dans le muscle parallèle à la colonne vertébrale des deux côtés des apophyses épineuses.
Utilisez des pinces ou des ciseaux pour retirer délicatement le muscle entre les apophyses épineuses. à l’aide d’un rongeur, extrayez les apophyses épineuses de la L6 vers la partie inférieure de la colonne thoracique. Insérez l’embout inférieur du rongeur sous la lame L5 et retirez méthodiquement l’os recouvrant la moelle épinière en prélevant plusieurs bouchées de celle-ci.
