Pour préparer la micro-aiguille de verre, placez des capillaires en verre borosilicaté dans la douille polaire. Après avoir réglé les paramètres requis, appuyez sur le bouton de traction pour générer l’aiguille. Ensuite, divisez les cellules souches positives à la GFP dans un tube.
Après avoir compté et granulé, mettez-les en suspension à la concentration souhaitée. Transférez la suspension cellulaire dans un tube de 1,5 millilitre et placez-la sur de la glace pour la transplantation. À l’aide d’un micropipet, chargez quatre microlitres de suspension cellulaire dans une micro-aiguille de verre.
Insérez l’aiguille dans le support prévu à cet effet sur le micro-injecteur et, à l’aide d’une pince à épiler, cassez la pointe de l’aiguille. Réglez la pression sur 10 PSI. À l’aide d’une pipette Pasteur, appliquez une goutte d’huile minérale sur une lame de verre calibrée et micro-injectez la suspension cellulaire dans la goutte pour noter le diamètre pour l’étalonnage du volume d’injection.
Après avoir réglé le bon volume, micro-injectez rapidement la suspension cellulaire dans la tranche. Au stéréomicroscope à fluorescence, vérifiez la présence des cellules dans les tranches et incubez-les à 37 degrés Celsius avec 5% de dioxyde de carbone.
