Pour commencer, obtenez des coupes organotypiques de souris transplantées avec des cellules souches neuroépithéliales dérivées de la moelle épinière humaine, ou cellules HSCNES. Retirez le milieu du bas de la membrane de l’insert et lavez les tranches trois fois avec du PBS ou du DPBS Dulbecco’s préchauffé. Ensuite, aspirez le DPBS et remplacez-le par 1,5 millilitre de formaldéhyde préchauffé à 4 %.
Ensuite, ajoutez un millilitre de formaldéhyde à 4 % sur le dessus de la membrane. Après avoir lavé trois fois avec DPBS, à l’aide d’un couteau chirurgical, coupez circonférentiellement la membrane de l’insert et séparez-la avec les tranches du composant en plastique de l’insert. Après la coloration par immunofluorescence, appliquez 200 microlitres de solution de montage sur une lame de verre propre.
À l’aide d’une pince à épiler droite, soulevez et transférez doucement la membrane flottante de la parabole de 35 millimètres sur une lamelle. Transférez ensuite la membrane sur la lame de verre préparée. Couvrez la membrane sur la lame de verre avec une nouvelle lamelle contenant 100 microlitres de solution de montage.
Laissez-le sécher toute la nuit sous un capot chimique foncé avant de procéder à l’imagerie confocale. Les cellules HSCNES transplantées dans le tissu de la moelle épinière ont montré une expression stable de la GFP pendant 30 jours, indiquant une bonne survie.
