Transformation à grande échelle de plasmides UAS-ADNc/ORF à partir d’un assemblage modulaire basé sur CRISPR en E. coli

Pour transformer les produits plasmidiques ADNc/ORF UAS obtenus à partir de l’assemblage modulaire basé sur CRISPR en Escherichia coli, pré-refroidissez des pointes de 10 microlitres à quatre degrés Celsius. De plus, pré-refroidissez des tubes de 1,5 millilitre dans un bloc de refroidissement en aluminium sur de la glace. Après avoir décongelé des cellules E. coli compétentes sur de la glace pendant cinq minutes, ajoutez une aliquote de 10 microlitres de cellules dans chaque tube pré-refroidi de 1,5 millilitre.

Ajoutez ensuite un microlitre de produits plasmidiques ADNc/ORF UAS dans chaque tube contenant 10 microlitres de cellules compétentes. Agitez doucement le tube pour mélanger et placez-le sur de la glace pendant 30 minutes. Incuber les tubes à 42 degrés Celsius dans un bain-marie pendant une minute.

Ensuite, refroidissez immédiatement sur de la glace pendant deux minutes. Ajoutez 100 microlitres de milieu SOC, préchauffé à 37 degrés Celsius, dans chaque tube à température ambiante et incubez les tubes dans un incubateur à agitation à 250 tr/min et 37 degrés Celsius pendant une heure. Ensuite, réchauffez les plaques LB contenant un antibiotique correspondant au gène de résistance aux antibiotiques du module UAS à 37 degrés Celsius.

Répartissez les cellules sur les plaques chaudes et incubez-les à 37 degrés Celsius pendant la nuit.