Pour commencer, prélevez le surnageant à partir de la culture de cellules souches mésenchymateuses dérivées de l’adipeux humain une fois que les cellules sont confluentes à 80 %. Prélevez soigneusement le surnageant à l’aide d’une pipette et transférez-le dans un tube à centrifuger de 50 millilitres. Centrifugez le tube à 300 x g pendant 10 minutes à température ambiante pour éliminer les cellules en suspension, puis utilisez une pipette pour recueillir le surnageant sans perturber la pastille.
Centrifugez le surnageant à 2000 x g pendant 10 minutes à quatre degrés Celsius pour éliminer les débris cellulaires. Prélevez le surnageant résultant à l’aide d’une pipette et filtrez-le à travers une membrane de 0,22 micron pour éliminer les grosses particules et les débris cellulaires. Soumettre le filtrat à une ultra-centrifugation à 10 000 x g pendant 30 minutes à quatre degrés Celsius.
Effectuez ensuite une centrifugation finale à 100 000 x g pendant 70 minutes à quatre degrés Celsius. À l’aide d’une pipette, prélever le surnageant sans prélever la pastille. Remettre la pastille en suspension dans du PBS avant de centrifuger le tube à 100 000 x g pendant 70 minutes à quatre degrés Celsius.
Retirez le surnageant et remettez en suspension la pastille obtenue de vésicules extracellulaires, ou VE, dans un millilitre de PBS. Enfin, transférez la suspension EV dans un tube à centrifuger d’un millilitre et stockez-la à quatre degrés Celsius jusqu’à une analyse plus approfondie. La microscopie électronique à transmission a clairement révélé la structure en forme de coupe des VE avec une membrane bicouche.
L’analyse du suivi des nanoparticules a indiqué qu’elles ont une distribution granulométrique d’environ 50 à 150 nanomètres. L’analyse par transfert Western a montré que les protéines marqueurs caractéristiques des VE étaient exprimées de manière fluide.
