Procédure de fixation et de post-fixation rétinienne pour la préparation d’échantillons TEM

Pour commencer la fixation antérieure des organoïdes rétiniens ou RO dérivés de cellules souches pluripotentes induites. À l’aide d’une pipette, déplacez doucement l’une des OI cultivées de la boîte de Pétri vers un tube de microcentrifugation de 1,5 millilitre. À l’aide d’une pipette, retirez le milieu de culture du tube de la microcentrifugeuse et ajoutez 1,5 millilitre de fixateur de 2% de paraformaldéhyde, 2% de fixateur de glutaraldéhyde.

Une fois les OI fixés, retirez le fixateur de paraformaldéhyde-glutaraldéhyde avant de procéder au lavage des organoïdes. Suspendez doucement les organoïdes dans le tube de la microcentrifugeuse en ajoutant 1 millilitre de PBS 0,01 molaire pour assurer un lavage complet. Ensuite, pipetez le PBS restant et remplacez-le par environ 150 microlitres d’acide osmique à 1 % jusqu’à ce que les blocs de tissu soient immergés.

Placez le tube de microcentrifugation dans une boîte sombre.