Dissection du muscle squelettique de la souris après une lésion de la notexine et procédure de dissociation cellulaire pour l’analyse de cellules uniques

Après avoir euthanasié la souris, disséquez les muscles TA et GA des deux membres postérieurs et placez-les dans le couvercle d’une boîte de Pétri. Utilisez des ciseaux pour couper le tissu en une bouillie hachée. Transférez le tissu haché dans un tube de 50 millilitres contenant cinq millilitres de tampon de dissociation glacé et conservez-le sur de la glace.

Une fois que les tubes d’échantillon sont chauffés à 37 degrés Celsius, incubez-les pendant 45 minutes en rotation dans un incubateur. Ajoutez 10 millilitres de produit de lavage dans les tubes d’échantillon et tourbillonnez-les. Centrifugez les tubes et aspirez le contenu à quatre millilitres.

Ensuite, ajoutez 0,5 millilitre de collagénase et de dispase aux cellules. Ensuite, vortex et incubez-les. Après l’incubation, centrifugez l’échantillon digéré et remettez la pastille en suspension à l’aide d’une pipette de cinq millilitres.

Ensuite, pré-mouillez les crépines à cellules de 40 micromètres placées sur des tubes de 50 millilitres avec cinq millilitres de produit de lavage. À l’aide d’une seringue de cinq millilitres avec une aiguille de calibre 20, aspirez et éjectez la suspension cellulaire 10 fois. Ensuite, filtrez la suspension cellulaire à travers la crépine de cellule de 40 micromètres pré-humidifiée.

Après avoir collecté et filtré les cellules restantes avec 10 millilitres de produit de lavage, granulez la suspension cellulaire par centrifugation, aspirez le surnageant du tube et secouez doucement la pastille pour la détacher.