Pour commencer, lancez le logiciel d’analyse de données sur un ordinateur de bureau. Cliquez sur fichier, puis sur navigateur et choisissez sélectionner un dossier pour ouvrir le dossier contenant les données d’imagerie acquises. Sélectionnez plusieurs lignes associées aux images choisies, y compris les contrôles non infectés et en excluant les images sursaturées.
Notez l’ID de l’image dans un cahier de laboratoire avec les informations enregistrées lors d’une deuxième session d’imagerie. Cliquez sur charger en tant que groupe pour assembler les images sélectionnées. Cliquez maintenant sur l’icône d’enregistrement pour enregistrer la nouvelle image de séquence dans un nouveau dossier pour une réanalyse des données brutes si nécessaire.
Ensuite, cliquez sur les options suivies de l’affichage et sélectionnez le facteur de compartimentage pour identifier le compartiment utilisé pour chaque image. Le facteur de compartimentage acquis sera affiché en haut de chaque image de la séquence. Pour corriger tous les facteurs de binning à la même valeur, double-cliquez d’abord sur l’image à ajuster.
Dans la fenêtre de l’outil, cliquez sur l’option d’ajustement de l’image, puis choisissez le facteur de compartimentage approprié. Double-cliquez sur l’image des souris non infectées, puis sélectionnez l’option Nombre dans le champ Unité. Ajustez l’échelle de couleurs à une valeur minimale de 600.
Choisissez les options de luminance dans le champ des unités pour afficher la radiance de l’image résultante. Avec la fenêtre de séquence active, choisissez l’option radiance dans le champ des unités. Désactivez la case individuelle dans la zone des limites de l’échelle de couleurs pour ajuster l’échelle de couleurs et la table des couleurs dans la palette d’outils.
Marquez l’échelle logarithmique et les cases manuelles, puis définissez les numéros d’échelle maximum en fonction de la commande non infectée et la zone avec le signal le plus élevé en tant que valeur maximale. Après avoir défini la même échelle pour toutes les images, double-cliquez sur chaque image, agrandissez la fenêtre et utilisez l’option d’exportation des graphiques pour exporter la vue de l’image dans un format d’image. Nommez les fichiers par traitement, suivi de l’ID de la souris et du point temporel.
Double-cliquez sur l’image de la séquence. Dans la fenêtre de la palette d’outils, cliquez sur la section d’outils ROI, puis appuyez sur l’icône carrée. Dessinez un rectangle sur toute la souris.
Cliquez sur la bordure du ROI créé et copiez et collez le même ROI pour chaque souris. Ensuite, nommez les retours sur investissement à enregistrer. Cliquez ensuite sur l’icône d’enregistrement dans la section de l’outil ROI.
Cochez la case Appliquer à la séquence. Appliquez ensuite les ROI enregistrés pour toutes les images en cliquant sur charger. Ajustez la position du retour sur investissement de chaque souris pour mieux l’adapter à la zone de mesure.
Lorsque toutes les souris ont été étiquetées, cliquez sur l’option Mesurer les retours sur investissement. Le tableau des mesures du retour sur investissement doit apparaître. Réglez les types de mesure sur la luminosité, les attributs d’image sur toutes les valeurs possibles et les dimensions de retour sur investissement en centimètres.
Cliquez ensuite sur l’option Sélectionner tout, puis sur Copier. Collez les données directement dans le logiciel d’analyse de tableaux. Organisez les colonnes de données pour trier correctement les groupes.
Ensuite, codez par couleur les données par groupes dans la feuille de calcul. Organisez les valeurs de flux total pour qu’elles correspondent aux valeurs de flux total ventral et dorsal de la même souris. Ensuite, additionnez-les pour obtenir la bioluminescence de l’ensemble du corps de chaque souris.
Calculez la moyenne et l’écart-type des valeurs additionnées pour chaque groupe. Tracez les données dans un logiciel statistique pour générer des graphiques. Enfin, créez un panneau avec des images bioluminescentes.
Placez chaque souris dans des colonnes et les points temporels dans des rangées pour construire une matrice d’efficacité des médicaments. Lorsque la méthode de bioluminescence est appliquée pour évaluer les agents antiparasitaires, une matrice d’efficacité du médicament est construite pour comparer les composés testés, illustrés ici par le posaconazole, au traitement médicamenteux standard utilisé pour la maladie de Chagas, le benznidazole à 100 milligrammes par kilogramme administré une fois par jour. Dans cette étude longitudinale, l’évolution temporelle de l’infection est illustrée en comparant un groupe non traité à un groupe traité.
Les résultats démontrent soit une réduction de la charge parasitaire, comme l’indique une bioluminescence réduite, soit une rechute illustrée par une augmentation de la charge parasitaire et une détection de lumière conséquente, suggérant un composé ou un régime de traitement inefficace. La lumière quantifiée est représentée par la somme des flux totaux ventral et dorsal en photons par seconde en fonction du temps d’infection.
