Pour commencer, préparez une dilution de 1 à 100 d’une solution mère de collagène dans du DPBS avec du magnésium et du calcium. Ajoutez 350 microlitres de la solution mère diluée dans la chambre correspondante et incubez pendant cinq minutes à température ambiante. Rincez toutes les chambres deux fois en utilisant 350 microlitres de DPBS avec du magnésium et du calcium pour éliminer le collagène et l’acide acétique restants.
Retirez les bouchons d’un site et basculez-les de l’autre côté. Après avoir rincé à nouveau la chambre, ajoutez-y 350 microlitres de milieu de croissance des cellules endothéliales. Retirez les bouchons d’un site et basculez-les de l’autre côté.
Ajoutez ensuite 350 microlitres de milieu de croissance des cellules endothéliales dans chaque chambre. Prenez des HUVECs cultivés aux passages un à trois avec une confluence cellulaire de 80 à 90 % dans le milieu de croissance des cellules endothéliales. Retirez ensuite le milieu de culture cellulaire d’une fiole de culture cellulaire T25 et lavez doucement les cellules avec trois à cinq millilitres de DPBS sans magnésium ni calcium.
Une fois la solution retirée, ajoutez un millilitre de réactif de dissociation de la trypsine et incubez pendant cinq minutes à 37 degrés Celsius jusqu’à ce que les cellules se détachent du ballon. Transférez les cellules détachées dans un tube en utilisant neuf millilitres de FBS à 5 % dans du PBS sans magnésium ni calcium. Centrifuger à 350G pendant cinq minutes à température ambiante.
Après avoir déplacé le surnageant, remettez en suspension la pastille cellulaire dans un millilitre de milieu de croissance cellulaire endothéliale. Ajoutez le volume respectif de cellules dans la chambre et incubez les biopuces dans un incubateur humidifié à 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone. Effectuez un remplacement du milieu de la chambre contenant les HUVECs avec 350 microlitres de milieu de croissance des cellules endothéliales après 24 heures.
Si des bulles d’air apparaissent dans les biopuces microfluidiques, fermez tous les ports de la biopuce à l’exception des ports de la chambre affectée. Inclinez la puce pour déplacer la bulle d’air près d’une extrémité de la cavité. À partir de l’orifice de l’autre extrémité, poussez 700 microlitres de milieu de culture cellulaire à travers la chambre tout en tenant les bouchons opposés.
