Pour commencer, avec un pinceau, transférez des embryons de drosophile déchlorés sur une longue bande de gélose à la vigne. À l’aide d’une aiguille de dissection, tracez environ 60 embryons le long du bord de la bande, les postérieurs tournés vers l’extérieur. Placez maintenant un ruban adhésif double face de 18 millimètres de long dans le sens de la longueur le long du bord d’une lamelle.
Après avoir retiré le support, appuyez doucement sur les embryons alignés, transférez la lamelle avec les embryons dans une boîte contenant un déshydratant. Ajoutez de l’huile de carbone halo par-dessus. Pour micro-injecter les embryons, chargez d’abord deux microlitres d’ADN dans une aiguille à l’aide d’une pipette étirée.
Placez les embryons alignés avec de l’huile de halo de carbone sous un microscope inversé. Ensuite, utilisez un micromanipulateur pour insérer l’aiguille dans les extrémités postérieures d’un embryon. Avec la commande au pied, injectez soigneusement l’ADN dans l’embryon.
Retirez l’aiguille après la fin de la micro-injection du premier embryon, puis déplacez-la vers l’extrémité postérieure de l’embryon suivant. Transférez les embryons injectés dans une plaque de gélose pour l’incubation. Lorsque les œufs ont éclos, préparez une fiole avec de la nourriture.
Ajoutez quelques gouttes d’eau distillée dans le flacon. À l’aide d’un stéréomicroscope et d’un pinceau, prélevez les larves écloses, puis transférez-les dans le flacon. Incuber le flacon à 25 degrés Celsius sous 50 à 60 % d’humidité pendant 10 jours.
Les embryons trop séchés semblent déformés et ne peuvent pas être utilisés pour la microinjection. Les embryons sous-séchés ont laissé échapper une grande quantité de cytoplasme lorsqu’ils ont été perforés, réduisant ainsi les taux de survie. Les embryons séchés de manière appropriée ne fuyaient qu’un petit volume, voire aucun, lors de l’injection.
La lignée drosophile exprimant l’intégrase phiC31 utilisée pour la micro-injection embryonnaire avait les yeux blancs. Les mouches âgées de ce génotype ont des yeux roses résultant de l’accumulation de protéines fluorescentes rouges exprimées spécifiquement dans l’œil. Des mouches transgéniques porteuses d’un transgène au site d’amarrage attP2 avec des yeux orange ont été produites avec succès.
