Expérimentation sur l’évolution de la température à l’aide de Sulfolobus acidocldarius

Pour commencer, utilisez les populations ancestrales de Sulfolobus acidocaldarius ressuscitées. Ajoutez BBM plus pour diluer les cultures à une DO 600 de 0,01. Pipetez le volume approprié de chacune des sept cultures dans trois tubes percés distincts de deux millilitres.

Scellez les tubes avec une membrane respirante, puis placez chaque ensemble de sept populations ancestrales dans des thermomélangeurs séparés. Réglez chaque thermomélangeur à la température requise et à 400 tr/min pour commencer l’expérience d’évolution. Après 48 heures, transférez 15 microlitres de chacune des cultures de transfert zéro dans 1,5 millilitre de milieu BBM plus réchauffé contenu dans un tube percé de deux millilitres étiqueté transfert un.

Scellez les tubes à l’aide d’une membrane perméable avant de les remettre dans des positions aléatoires dans les thermomélangeurs respectifs. Mesurez l’OD600 du zéro de transfert dans un spectrophotomètre à plaques pour terminer le premier transfert. Répétez le transfert de culture et la mesure de la densité optique tous les deux jours pour effectuer les transferts jusqu’à ce que le nombre souhaité de transferts soit atteint.

Préparez les stocks de glycérol des populations après chaque 10e transfert et lors du transfert final, et étiquetez le tube avec l’identifiant de la population ancestrale et le numéro de transfert. Les thermomélangeurs doivent être réglés à des températures constantes de 75 degrés Celsius et 65 degrés Celsius. Un troisième thermomélangeur sera progressivement diminué pour observer la réponse au changement progressif.