Pour commencer, pesez cinq grammes de polymère sec super absorbant ou SAP, et mélangez-le avec 500 millilitres de solution nutritive MMS1. Environ une semaine avant l’assemblage, faites germer les graines de plantago lanceolata sur du papier buvard imbibé d’une solution nutritive MMS1 dans une boîte de Pétri. Ensuite, incubez la boîte de Pétri dans l’obscurité à température ambiante.
Pour commencer à assembler le système SAP-AS, placez la tige du semis dans l’encoche sur le côté de la boîte de Pétri avec la racine vers l’intérieur et les cotylédons ou les feuilles et les tiges vers l’extérieur. Couvrez les racines d’environ 1,5 à deux grammes de vermiculite. Ensuite, hydratez le compartiment racinaire avec huit millilitres de solution nutritive MMS1.
Nettoyez un espace sans vermiculite le long du filtre à mailles en nylon sur le côté du compartiment racinaire et ajoutez cinq grammes de SAP hydraté. Ajoutez ensuite 15 grammes de SAP hydraté dans le compartiment de remplissage. Alignez maintenant les encoches latérales du couvercle et le fond de la boîte de Pétri pour éviter d’endommager la tige et fermez le couvercle.
Fermez ensuite la boîte de Pétri avec une bande de parafilm, en joignant la base et le couvercle. Pesez la boîte de Pétri et notez son poids moyen pour déterminer quand le SAP-AS a besoin d’être réhydraté. Empilez ensuite les boîtes de Pétri pour optimiser l’espace.
Utilisez un couvercle opaque avec une ouverture sur le côté pour garder les plants dans l’obscurité. À l’aide d’une bougie à flamme ou d’un bec Bunsen, chauffez la pipette en verre et étirez le tube de verre pendant qu’il fond pour le séparer. Sous un stéréomicroscope, cassez la pointe de la pipette en verre pour réduire son diamètre interne.
Ouvrez maintenant la boîte de Pétri et localisez l’endroit où la spore doit être placée. Dégagez un espace parmi les cinq grammes de sève hydratée le long de la membrane filtrante en maille de nylon pour exposer une section d’une racine. Sous le microscope de dissection, prélevez une spore dans une suspension liquide à l’aide de la pipette extrudée, tout en pipetant un peu de liquide avant de prélever la spore.
Après cela, déposez soigneusement la spore sur la racine. Ensuite, replacez la sève sur le fragment de racine pour maintenir un microenvironnement humide pour la racine et les spores. Après 24 heures, si nécessaire, irriguez le compartiment racinaire en prenant soin de ne pas laver les spores.
Alignez les encoches latérales du couvercle avec le fond de la boîte de Pétri pour éviter d’endommager la tige du semis et fermez la boîte de Pétri avec le couvercle.
