Après avoir ramassé le scieur de pin, les coléoptères Monochamus alternatus, placez le coléoptère dans un tube stérile contenant des brindilles fraîches. Élevez les coléoptères dans un incubateur non humidifié à 25 degrés Celsius. Après l’incubation, des coléoptères records montrent une diminution de l’alimentation et de la mobilité.
Transférez les coléoptères morts raides dans des chambres humides. Disséquez les coléoptères atteints d’infections fongiques dans les positions principales telles que les antennes, la tête, le thorax, l’abdomen, les ailes et les pattes. À l’aide de ciseaux, coupez les téguments de chaque position en petits morceaux.
Appuyez doucement sur la surface extérieure de ces morceaux sur la plaque PDA contenant des antibiotiques. Scellez la plaque avec du parafilm et incubez à 25 degrés Celsius jusqu’à ce que les tissus soient entièrement recouverts de mycélium. Transférez ensuite la colonie unique selon les propriétés phénotypiques sur une nouvelle plaque PDA.
Extrayez l’ADN génomique à l’aide du kit d’isolement d’ADN génomique de champignons. Préparez un mélange de PCR avec les amorces ITS1 et ITS4 pour amplifier la région ADNr-ITS de l’ADN. À l’aide d’un appareil photo, capturez la morphologie d’une colonie fongique pure mature sur les faces avant et arrière de la plaque PDA.
Cueillez les conidies des colonies fongiques pures à l’aide d’une aiguille d’inoculation et transférez-les sur une lame de verre avec une goutte d’eau stérile. Placez ensuite une lamelle sur l’échantillon sans introduire de bulles. Coupez un bloc de gélose de cinq millimètres avec un scalpel du bord de la colonie fongique et transférez-le sur une lame de verre propre avec une goutte d’eau stérile.
À l’aide d’une aiguille fine, séparez soigneusement les champignons de la gélose pour observer des structures spécifiques. Au microscope optique, observez la forme asexuée des champignons, y compris la posture des hyphes, des conidiophores, des phialides et des conidies.
