Pour commencer, établissez les sphéroïdes multicellulaires tridimensionnels ou MCS à partir de cellules d’adénocarcinome pulmonaire humain ou de cellules iRFP A549. Ensemencez les cellules dans une micro-plaque sphéroïde à fond rond à 96 puits à fixation ultra-faible en utilisant 100 microlitres de milieu de croissance complet complété par 0,3% de collagène. Centrifuger les microplaques à 300 G pendant sept minutes à quatre degrés Celsius pour faciliter la formation du MCS.
Après la centrifugation, examinez la morphologie des sphéroïdes au microscope pour assurer l’agrégation cellulaire. Remplacez 100 microlitres de milieu de croissance dans chaque puits par un milieu de croissance complet frais tous les deux jours. Lors de l’observation au microscope, choisissez des sphéroïdes de forme ronde et aux bords globalement lisses, mais avec cinq à 10 bourgeons rugueux et un diamètre approprié.
Mesurez la fluorescence de l’iRFP pour sélectionner le MCS avec des signaux fluorescents à un écart type de la moyenne.
