Commencez l’intervention chirurgicale sur la souris correctement anesthésiée en injectant du chlorhydrate de buprénorphine par voie sous-cutanée pour réduire la douleur. Appliquez une pommade ophtalmique sur les yeux pour prévenir la sécheresse. Placez la souris en posture dorsale et fixez les membres en position d’étirement avec des rubans.
Désinfectez la peau du dos à l’aide d’écouvillons alternés d’iode et d’alcool, au moins trois fois chacun. Ensuite, à l’aide de ciseaux chirurgicaux, coupez une incision de 0,5 à un centimètre sur le dos gauche de l’animal. Utilisez soigneusement des pinces pour séparer les tissus musculaires et adipeux jusqu’à ce que la paroi thoracique et le mouvement des poumons soient visibles.
À l’aide d’une pipette, transférez un stéroïde multicellulaire sélectionné, ou MCS, d’une microplaque dans une boîte de Pétri en verre contenant du PBS glacé. Fixez une aiguille de calibre 20 à une seringue en verre de 100 microlitres et pré-refroidissez-les sur de la glace. Prélevez ensuite 20 microlitres d’un mélange pré-refroidi de PBS et de Matrigel.
À l’aide de la seringue, aspirez rapidement un MCS de la boîte de Pétri dans un volume minimum de mélange PBS-Matrigel, en maintenant le sphéroïde dans la partie métallique de l’aiguille. Insérez doucement l’aiguille verticalement entre deux os des côtes jusqu’à une profondeur d’environ trois millimètres et injectez lentement les 20 microlitres du mélange contenant le MCS aspiré. Retirez ensuite délicatement l’aiguille.
Appliquez une pommade antibiotique triple sur la plaie. Scellez l’incision avec des clips chirurgicaux à retirer après deux semaines. Placez l’animal sur un coussin chauffant infrarouge et couvrez-le de lingettes de laboratoire pour maintenir la température corporelle.
Surveillez l’animal pendant au moins 30 à 60 minutes jusqu’à ce qu’il se réveille et se déplace correctement. À l’aide d’un système d’imagerie de petits animaux sur un canal de 700 nanomètres, mesurez le signal fluorescent IRFP de la xénogreffe tumorale de la souris anesthésiée tous les trois à quatre jours. Mesurez la fluorescence dans quatre postures, gauche, droite, dorsale et ventrale.
L’intensité nette de la fluorescence des côtés gauche et ventral a montré une tendance similaire de progression tumorale, la fluorescence du côté ventral augmentant légèrement plus lentement que la fluorescence du côté gauche.
