Pour commencer, obtenez des embryons de souris femelles fraîchement accouplées. Préparez 12 microgouttelettes de milieu optimisé pour le potassium simplex au fond d’une boîte de Pétri de 35 millimètres. Couvrez les microgouttelettes avec trois à cinq millilitres d’huile minérale et placez les boîtes de Pétri dans un incubateur à 37 degrés Celsius avec 5% de dioxyde de carbone pour l’équilibre.
À l’aide d’une pipette de transfert, transférez les embryons de souris du milieu M2 vers le milieu KSOM. Placez les embryons lavés dans les microgouttelettes KSOM préparées et incuberez-les à 37 degrés Celsius avec 5% de dioxyde de carbone pendant quatre jours. Sélectionnez les blastocystes avantageux en fonction de leur taille, de leur masse cellulaire interne, du nombre de cellules trophoblastiques et de leur degré d’expansion.
Ajoutez un millilitre de gélatine à 2 % dans une plaque de culture à 12 puits et incubez à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes. Aspirez ensuite l’excédent de gélatine et laissez sécher complètement le fond de l’assiette. Ensemencez des cellules d’adénocarcinome de l’endomètre humain ou des cellules d’Ishikawa dans la plaque à 12 puits recouverte de gélatine et incubez la plaque pendant 24 heures.
Placez délicatement cinq à 15 blastocystes frais dans chaque puits de la plaque à 12 puits contenant les cellules. Après 48 heures, observez les embryons au microscope pour évaluer leur état d’attachement après avoir déplacé la plaque trois fois. Les embryons non attachés flottent ou roulent à la surface des cellules.
Enfin, calculez le taux d’implantation de l’embryon en présence de différentes concentrations d’œstrogènes. Les résultats ont démontré que des concentrations physiologiques proches de 17 bêta-œstradiol augmentaient les taux d’implantation embryonnaire par rapport au témoin sans 17 bêta-œstradiol. Cependant, des concentrations ultra-élevées de 17 bêta-œstradiol autour de 100 nanomolaires ont considérablement réduit les taux d’implantation d’embryons.
