Pour commencer, procurez-vous le bouillon Lysogeny ou milieu LB et ajoutez les antibiotiques au milieu. Aliquote cinq millilitres du milieu dans des tubes à essai stériles avec bouchons. Inoculer le milieu avec des souches d’Escherichia coli exprimant des plasmides prélevés dans des stocks de congélation et incuber la culture dans un agitateur pendant la nuit.
Ensuite, préparez une solution de sulfamide de thiophène de 10 millimolaires dans du DMSO et un vortex pour bien mélanger. Diluez les cultures 1 à 100 fois dans 10 millilitres de milieu prélevé dans des tubes coniques de 15 millilitres. Vortex brièvement pour mélanger.
Ajouter les cultures dans les puits appropriés d’une plaque de 96 puits. Après le mélange, préparez une série de dilutions des rangées A à E, en transférant 50 microlitres de la solution à chaque fois. Couvrez la plaque avec du ruban adhésif microporeux et incubez-la.
Après avoir retiré la bande, à l’aide d’un lecteur de plaques, lisez la densité optique à 600 nanomètres GFP et mCherry. Enfin, enregistrez et tracez les données sous forme de fluorescence normalisée par cellule. Les données sur les composés de 3-thiophène sulfamide suggèrent que les composés 1A et 3B étaient chacun inhibiteurs de LuxR/HapR à des degrés différents, tandis que les composés 2B n’avaient aucune activité.
